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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
Galerone (TOK001)(R)-哌-2-羧酸

山柰酚-槐二糖-7-鼠李糖苷(1S,2R)-(-)-1-氨基-2-茚

己酮可可（標準品）5,5-二甲基-1,環(huán)己二酮

波必利（標準品）酮肟

醉魚草皂苷IVb（標準品）羥基脲

二酸倍他米松（標準品）酸

厄多司坦（標準品）無水醋酸鈉

吡美莫司;匹美莫司二二茂鈦

托拉塞米（標準品）酮酸

萘哌地爾四

萘哌地爾（標準品）N,N-二甲基酰

厄貝沙坦（標準品）(2-吡啶基)-甲

馬來酸替加色羅（標準品） B

三雙脒（標準品）磺酸鈉

焦地黃甙B1（標準品）1-氨基-1-環(huán)基鹽酸鹽

N-6022N-溴代丁二酰亞

巴柳氮鈉（標準品）N-代丁二酰亞

3,4,5-*酸（標準品）抗氧劑264

細胞周期后期促進蛋白亞基11E2F1/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)錄因子E2F-1IgG100 ul

腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白2E2F2/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)錄因子E2F-2IgG100 ul

酸化細胞分裂周期蛋白16E2F3/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)錄因子E2F-3IgG100 ul

DNA修復酶相互作用蛋白E2F4/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)錄因子E2F-4IgG100 ul

脂肪細胞膜相關(guān)蛋白E2F5/FITC  熒光素標記轉(zhuǎn)錄因子E2F-5IgG100 ul

載脂蛋白A1結(jié)合蛋白E2F6/FITC  熒光素標記抗轉(zhuǎn)錄因子E2F-6IgG100 ul

載脂蛋白B-mRNA編輯酶復合物1E2 tag/FITC  熒光素標記E2 tag標簽IgG100µg

載脂蛋白B-mRNA編輯酶復合物2E2 tag/HRP  辣根過氧化物酶標記E2 tag標簽IgG100 ul

載脂蛋白B-mRNA編輯酶復合物3BE7 proin/FITC  熒光素標記頭瘤病毒16型E7IgG20 ul
鵝源性成分(Goose)核酸試劑盒廠家多巴胺脫羧酶抗體Folic acid中文名：葉酸別名：分子式：C19H19N7O6

結(jié)蛋白抗體Amprolium hydrochloride中文名：鹽酸氨丙林別名：分子式：C14H20Cl2N4

DISC1 C端抗體4-Amiphenylarsonic acid中文名：4-氨基苯胂酸別名：分子式：C6H7AsO4

DISC1 N端抗體Furosemide中文名：別名：分子式：C12H11ClN2O5S

抑癌基因抗體Ethyl 3-(4-(methylami)-3-nitro-N-(pyridin-2-yl)benzamido)propaate中文名：別名：分子式：C18H20N4O5