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細(xì)菌專用蛋白酶抑制劑混合液反應(yīng)五要素

更新時(shí)間:2022-03-01點(diǎn)擊次數(shù):998

細(xì)菌專用蛋白酶抑制劑混合液反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

內(nèi)皮細(xì)胞分化G蛋白偶聯(lián)受體8抗體

神經(jīng)細(xì)胞鳥苷酸置換因子NGEF抗體

磷酸化真核啟動(dòng)因子2α抗體

長(zhǎng)鏈脂肪酸延長(zhǎng)酶ELOVL2抗體

長(zhǎng)鏈脂肪酸延長(zhǎng)酶長(zhǎng)ELOVL5抗體

有脊椎動(dòng)物腦發(fā)育相關(guān)蛋白Emx1抗體

外胚層神經(jīng)皮層蛋白1抗體

烯醇化酶超家族成員1抗體

核苷酸內(nèi)焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體

內(nèi)皮細(xì)胞活化蛋白受體抗體

效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體1抗體

早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體

胞吞調(diào)控蛋白Eps15抗體

真核翻譯起始因子4E抗體

核輸出蛋白5抗體

腸致病性大腸桿菌抗體

E4F轉(zhuǎn)錄因子1抗體

睪酮調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)和腫瘤抑制基因抗體

聚合酶延伸因子2抗體

聚合酶延伸因子抗體

神經(jīng)生長(zhǎng)因子調(diào)控抑制蛋白抗體

內(nèi)皮細(xì)胞分化鞘脂G蛋白偶聯(lián)受體1抗體

紅細(xì)胞分化相關(guān)因子1抗體

微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體

內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體

雌激素受體β抗體


TEL:021-61210612

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