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熒光-PCR法的常見應(yīng)用有哪些?

更新時(shí)間:2021-09-18點(diǎn)擊次數(shù):1101
   熒光-PCR法定量技術(shù)一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
  熒光-PCR法的應(yīng)用十分廣泛,舉例說明一下:
  1.核酸定量分析
  對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測,比如甲型H1N1流感,轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。
  2.基因表達(dá)差異分析
  比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等),特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證。
  3.SNP檢測
  檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個(gè)體對不同疾病的易感性或者個(gè)體對特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義,因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性,一旦SNP的序列信息是已知的,采用這種技術(shù)進(jìn)行高通量的SNP檢測將會變得簡單而準(zhǔn)確。
  4.甲基化檢測
  甲基化同人類的許多疾病有關(guān),特別是癌癥。一種技術(shù)在擴(kuò)增之前先處理DNA,使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影響,用特異性的引物和Taqman探針來區(qū)分甲基化和非甲基化的DNA,這種方法不僅方便而且靈敏度更高。
  5.產(chǎn)前診斷
  人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治療,到目前為止,還只能只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,易為孕婦所接受。
  6.病原體檢測
  采用熒光-PCR檢測技術(shù)可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)。

TEL:021-61210612

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